?Sanger
Sanger發(fā)音
英：[?s??ɡ?] 美：[?s???]
英： 美：
Sanger中文意思翻譯
Sanger測序的原理？
Sanger測序是一種DNA測序方法，由Frederick Sanger等人發(fā)明。其原理是通過在DNA合成過程中逐漸加入一種二進制的特殊核苷酸，使其在合成過程中隨機地被加入，并以此得到DNA序列信息。
下面是詳細的Sanger測序原理及步驟：
1. 實驗人員首先需要將待測DNA復(fù)制許多份，即制備大量的DNA模板。
2. 對DNA模板進行PCR擴增，以增大樣本中目標(biāo)序列數(shù)量。
3. 在PCR反應(yīng)中，使用特殊的、與普通核苷酸不同的dNTPs，稱為ddNTPs。ddNTPs在DNA合成中一旦被加入，便會終止合成，從而導(dǎo)致合成長度的隨機截斷。
4. 截斷出的DNA片段分別按照大小進行電泳分離。
5. 逐個讀取DNA分子，根據(jù)大小排序。使用帶標(biāo)簽的引物，利用熒光或放射性標(biāo)記物來掃描單個ddNTP引起的 DNA鏈的末端長度。熒光會因dNTPs生物化學(xué)反應(yīng)而失活。
6. 以這種方式進行的一次測序，只能獲得目標(biāo)DNA區(qū)域的一端，需要反復(fù)進行多次測序。
7. 最后，通過多次測序結(jié)果疊加得到目標(biāo)DNA序列。
Sanger 雙脫氧法測序原理，簡述測序技術(shù)發(fā)展趨勢
DNA鏈中的核苷酸是以3`，5`-**酸二酯鍵相連接，合成DNA所用的底物是2`-脫氧核苷三**酸（dNTP），在Sanger 雙脫氧鏈終止法中被摻入了2`，3`-雙脫氧核苷三**酸(ddNTP),當(dāng)ddNTP位于鏈延伸末端時, 由于它沒有3`- OH，不能再與其它的脫氧核苷酸形成3′,5′-**酸二酯鍵，DNA合成便在此處終止，如果此處摻入的是一個ddATP，則新生鏈的末端就是A，依次類推可以通過摻入ddTTP、 ddCTP、 ddGTP ，則新生鏈的末端為T、C或G，根據(jù)這個原理，Sanger與1977年建立了雙脫氧鏈終止測序法。他本人也因此而獲得了諾貝爾獎。
以單鏈或雙鏈DNA為模板，采用DNA引物引導(dǎo)新生DNA的合成，因此又稱為引物合成法，或酶促引物合成法。主要是基于DNA聚合酶的催化特性：①以DNA為模板，根據(jù)堿基配對的原則逐個將dNTP加到與模板結(jié)合的寡核苷酸引物的3′-OH末端，形成正確的模板DNA互補鏈；②能以dNTP作為底物，也能利用ddNTP作底物，將其摻入寡核苷酸鏈的3 ′末端而終止新生互補鏈的延伸。
如果在DNA的合成反應(yīng)中，除了加入4種正常的脫氧核苷三**酸（dNTP）外，再加入一種少量的2ˊ,3ˊ ddNTP，那么多核苷酸鏈的延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止展開競爭，所以反應(yīng)產(chǎn)物是一系列的長短不一的核苷酸鏈。
在4組獨立的DNA合成反應(yīng)中，分別加入4種不同的ddNTP，結(jié)果將生成4組核苷酸鏈，它們將分別（隨機）終止于每一個A，每一個G，每一個C，每一個T的位置上。對這4組核苷酸鏈進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，就可讀出序列。
測序現(xiàn)在是第二代技術(shù)為主，454，solexa,solid等等，以后將基于納米技術(shù)，進行單分子測序
比如隧道探針法等